El problema con la función archivo.readlines() es que extrae cada línea del archivo de texto manteniendo el carácter oculto de salto de línea (\n) al final de cada frase.
En Python hay una forma sumamente elegante y rápida (al estilo "Java Stream" pero en una sola línea) llamada Comprensión de listas (List Comprehension).
Para limpiar esos saltos de línea y guardar todo en una lista limpia, modifica tu código de la siguiente manera:
with open("lista_preguntas.txt", "r", encoding="utf-8") as archivo:
# Leemos, limpiamos el \n con .strip() y guardamos en la lista todo de un golpe
preguntas_leidas = [linea.strip() for linea in archivo.readlines()]
